清热解毒口服液指纹图谱HPLC检测法

发布时间：2023-03-14

色谱条件：Waters e2695 高效液相色谱仪（2998 PDA检测器），以 Diomonsil Plus C18（4.6mm*250mm, 5μm）为色谱柱，以甲醇（A）-0.4%甲酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1mL/min，柱温35℃，进样量 10μL，检测波长为238nm、280nm。梯度洗脱程序见表1。

表1 指纹图谱色谱梯度程序

时间（min）	流动相A%-甲醇	流动相B%-0.4%甲酸水
0	22	78
16	22	78
40	36	64
62	56	44
85	80	20
90	80	20

供试品制备：精密量取本品口服液1mL，置5mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得；或取颗粒剂1袋，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%甲醇10mL，称定重量，超声处理(功率160W，频率50kHz)30分钟，放冷，再用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

图1 清热解毒口服液/颗粒剂（处方一）对照指纹图谱及混合对照图谱

表2 清热解毒口服液/颗粒剂（处方一）对照指纹图谱共有峰归属

峰号	相对保留时间	色谱峰指认	归属	峰号	相对保留时间	色谱峰指认	归属
1	0.10	新绿原酸^﹡	金银花	16	0.74	3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸^﹡	金银花
2	0.11	（R,S）-告伊春^﹡	板蓝根	17	0.76	连翘酯苷A^﹡	连翘
3	0.16	绿原酸^﹡	金银花	18	0.78	未知4	黄芩
4	0.18	隐绿原酸^﹡	金银花	19	0.90	4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸^﹡	金银花
5	0.19	京尼平龙胆双糖苷^﹡	栀子	20	0.94	6’-O-香豆酰基京尼平龙胆二糖苷^﹡﹡	栀子
6	0.21	咖啡酸^﹡	金银花	21	0.98	连翘苷^﹡	连翘
7	0.24	未知1（C₁₈H₂₂O₁₁）^﹡﹡	金银花	22	1	黄芩苷^﹡	黄芩
8	0.26	龙胆苦苷^﹡	龙胆	23	1.07	去甲汉黄芩素苷^﹡﹡	黄芩
9	0.28	栀子苷^﹡	栀子	24	1.10	未知5	黄芩
10	0.31	芒果苷^﹡	知母、龙胆	25	1.12	千纸层素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷^﹡	黄芩
11	0.51	连翘酯苷Ⅰ^﹡	连翘	26	1.15	汉黄芩苷^﹡	黄芩
12	0.55	未知2	金银花	27	1.24	哈巴俄苷^﹡	玄参
13	0.59	苯甲酸钠^﹡	防腐剂	28	1.25	黄芩素^﹡	黄芩
14	0.66	未知3	黄芩	29	1.36	汉黄芩素^﹡	黄芩
15	0.73	3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸^﹡	金银花	30	1.41	千纸层素A^﹡	黄芩

注：^﹡为经对照品验证成分；^﹡﹡为液质鉴别及参照文献验证成分

判定依据：以 0.90 作为相似度合格判定限度